Tumpahan minyak sering terjadi dalam kegiatan industri perminyakan yang dapat mencemari lingkungan. Bioremediasi adalah salah satu metode paling aman untuk mengangani lingkungan yang tercemar minyak bumi dengan memanfaatkan bakteri. Bakteri diisolasi dari tanah yang tercemari minyak berat yang diberi kotoran sapi dan kuda. Proses biodegradasi ditingkatkan dengan penambahan alkilbenzena sulfonat linear (LAS). Tiga isolat terbaik dan kombinasinya diaplikasikan untuk mendegradasi limbah minyak berat dengan tambahan alkilbenzena sulfonat linear. Parameter yang diamati adalah Total Petroleum Hydrocarbon (TPH) padat, TPH cair, Total Plate Count (TPC), Kebutuhan Oksigen Kimiawi (KOK), dan pH. MY7, MY12, dan MYFlr dipilih sebagai 3 isolat terbaik karena memiliki nilai persentase degradasi yang paling tinggi, yaitu 32.26, 58.25, dan 40.74%. Penambahan alkilbenzena sulfonat linear mampu meningkatkan kelarutan minyak bumi di dalam air sehingga terjadi penurunan nilai TPH padat, kenaikan TPH cair, serta kenaikan nilai KOK. Nilai TPH padat pada kombinasi tiga isolat hari ke-21 sebesar 2.33% (b/b), nilai TPH cair sebesar 1.68% (b/v), dan nilai KOK sebesar 246456 mg/mL. Persentase degradasi kombinasi tiga isolat hari ke-21 adalah 81.56%. Kombinasi tiga isolat lebih mampu mendegradasi limbah minyak berat dibandingkan isolat tunggal.